BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒是基于廣泛采用的BCA法開發(fā)的，為簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、敏感且兼容性強(qiáng)的蛋白濃度檢測(cè)提供解決方案。該試劑盒具有高靈敏度，可檢測(cè)濃度至25μg/ml，最小檢測(cè)量為0.5μg，樣品需1?20μl。

BCA法測(cè)定不受絕大部分化學(xué)物質(zhì)干擾，可兼容高達(dá)5%的SDS、Triton X-100、Tween 20、60、80。然而，試劑盒對(duì)螯合劑和高濃度還原劑敏感，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，DTT低于1mM，β?Mercaptoethanol低于0.01%。這些特性確保了準(zhǔn)確測(cè)定蛋白濃度，并提供可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

操作使用：

1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

a.取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。

b.取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入980µl稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20℃長期保存。

2.BCA工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5mlBCA試劑A加100μl BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

3.蛋白濃度測(cè)定

a.將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b.加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl。請(qǐng)注意記錄樣品體積。

c.各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置2小時(shí)，或60℃放置30分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長孵育時(shí)間。

d.用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

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