英諾思EasyIso™小鼠CD3 T細(xì)胞分離試劑盒（SN4101）實(shí)驗(yàn)操作全解析

　　作為免疫學(xué)研究的重要工具，英諾思EasyIso™小鼠CD3 T細(xì)胞分離試劑盒（貨號(hào)SN4101）憑借其18分鐘快速分離和高達(dá)99%的純度表現(xiàn)，已成為實(shí)驗(yàn)室高效獲取高質(zhì)量T細(xì)胞的s選方案。本文將詳解其無(wú)柱磁極分離技術(shù)的操作流程，助您快速掌握實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)。

　　一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

　　?核心試劑：含生物素偶聯(lián)抗體的分離雞尾酒（EasyIso™Mouse CD3 T cell Isolation Cocktail）、鏈霉親和素納米磁珠（Streptavidin Nanobeads）

　　?專用緩沖液：FACS Buffer（含0.02%EDTA+2%FBS，比常規(guī)PBS提高20%細(xì)胞得率）

　　?儀器配置：磁力架（單孔/聯(lián)排）、70μm無(wú)菌尼龍濾網(wǎng)、離心機(jī)

　　二、六步標(biāo)準(zhǔn)化流程

　　1.單細(xì)胞懸液制備

　　取小鼠脾臟研磨后經(jīng)70μm濾網(wǎng)過(guò)濾，調(diào)整濃度至1×10?cells/mL，全程保持無(wú)菌操作。

　　2.抗體標(biāo)記

　　按100μL/mL比例加入分離雞尾酒，常溫孵育10分鐘。該步驟通過(guò)生物素抗體特異性標(biāo)記非CD3細(xì)胞。

　　3.磁珠偶聯(lián)

　　震蕩混勻納米磁珠30秒后，以100μL/mL比例加入樣本，輕柔混勻后靜置5分鐘，形成磁珠-非靶細(xì)胞復(fù)合物。

　　4.體積調(diào)整

　　根據(jù)容器規(guī)格加入FACS Buffer：

　　o流式管：補(bǔ)至2.5 mL

　　o離心管：補(bǔ)至7.5 mL

　　5.磁極分離

　　樣本垂直置于磁力架：

　　o單孔磁架：吸附3分鐘

　　o聯(lián)排磁架：吸附5分鐘

　　通過(guò)無(wú)柱磁極技術(shù)直接傾倒上清，即可在2分鐘內(nèi)完成目標(biāo)細(xì)胞收集。

　　6.即時(shí)應(yīng)用

　　分離后的CD3 T細(xì)胞無(wú)需額外處理，可直接用于：

　　?流式細(xì)胞術(shù)

　　?體外培養(yǎng)擴(kuò)增

　　?細(xì)胞因子分泌檢測(cè)

　　三、關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)

　　1.樣本預(yù)處理：脾臟無(wú)需裂紅處理，避免細(xì)胞活性損失

　　2.無(wú)菌保障：全程在生物安全柜中操作，耗材預(yù)先滅菌

　　3.磁珠活化：使用前充分震蕩磁珠30秒，確保分散均勻

　　4.滲透壓穩(wěn)定：嚴(yán)格使用專用FACS Buffer，維持細(xì)胞膜完整性

　　四、性能驗(yàn)證數(shù)據(jù)

　　C57BL/6小鼠脾臟樣本測(cè)試顯示：

　　?初始CD3+比例：33%（未分選）

　　?分選后純度：98.7%（流式驗(yàn)證）

　　?細(xì)胞活性：>95%（臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)）

　　六、選擇英諾思SN4101的三大優(yōu)勢(shì)：

　　1.時(shí)間效率：20分鐘內(nèi)完成全流程，比傳統(tǒng)分選快3倍

　　2.成本節(jié)約：無(wú)需購(gòu)置分選柱，單次實(shí)驗(yàn)耗材成本降低40%

　　3.下游兼容：分離細(xì)胞可直接用于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等高敏實(shí)驗(yàn)

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